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【货号】 BP-DL503
【规格】 100mL
【保存】 2~8℃,避光,12个月。
【产品组成】
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【产品简介】
伊文思蓝(Evans Blue)又称偶氮蓝,分子式C34H24N6Na4O14S4,分子量为960.80,CAS号为314-136。伊文思蓝与台盼蓝都是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性和细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。活细胞因有外排功能而无法被伊文思蓝染色,因此可以通过此方法在显微镜下区分死细胞与活细胞,但无法区分死亡与坏死。
【使用方法】
(一)血脑屏障通透性
1、取处理后的实验动物(以小鼠为例),静脉注射伊文思蓝染色液(1%),小鼠眼睛、皮肤出现蓝色。0.5~1h后处死小鼠,取目的脑组织。
2、脑组织置于1.5mL离心管中,加入1mL PBS,迅速用组织匀浆器将脑组织制成匀浆,离心。
3、取上清,加入等量三氯乙酸,4℃孵育。该步骤亦可采用如下操作: 取上清,按上清:丙酮=3:7比例加入丙酮,室温孵育24h。
4、离心15min。
5、取上述溶液,用分光光度计测620nm处吸光值(OD值)。同时测定已知不同梯度的标准依文思蓝的OD值,绘制标准曲线。根据标准曲线计算出待测待测样品的依文思蓝含量。
(二)活细胞染色
1、取100μL重悬细胞到常规离心管内,入100μL伊文思蓝染色液(1%)轻轻混匀染色(染色时间可适当延长,但不宜超过10min)。
2、吸取少量经过染色后的细胞,用血细胞计数板计数。通常如果要比较精确地进行定量,每个细胞样品至少数500个细胞,数出蓝色细胞和细胞总数。
细胞存活率计算公式如下: 细胞存活率=(细胞总数-蓝色细胞数)/细胞总数×100%
【染色结果】
【注意事项】
1、伊文思蓝染色液(1%)对人体有轻微毒性,请小心防护。
2、细胞染色时,注意凋亡小体偶尔也有拒染现象。
3、血脑屏障通透性实验中,伊文思蓝染色液(1%)注射量应根据不同动物以及动物的重量调整。
4、最好采用低温冷冻离心机进行离心。
5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。