酸性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)说明书

【产品组成】

酸性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)由ACP固定液、AS-BI Buffer、GBC染色液、ACP Buffer、Lea苏木素染色液组成。

【保存条件】

 —20℃,避光,6个月

【产品概述】

酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH为4.5～5.5。

酸性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)以萘酚AS-BI为底物，在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚，萘酚与重氮盐偶联生成有色产物，定位于细胞质中。对某些酸性磷酸酶来讲，Cu2+、酒石酸根离子和四氯化碳以及醛类也都是抑制剂，Mn2+为该酶的激活剂。多用于新鲜血涂片、细胞涂片、冰冻切片等。

【使用方法】

(一)血液、细胞涂片：

1、推片：取新鲜血液或骨髓涂片置于载坡片上，推玻片于载玻片保持30度，置于血液或细胞滴液的正前方，稍往后移与血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动至铺满血膜为止。

2、自然晾干，ACP固定液4℃固定30s～3min，多数情况下30～60s即可。

3、水洗，稍微晾干(不易过分干燥)。

4、切片入ACP孵育液，置于37℃温箱，避光浸染45～60min，水洗。

5、复染：Lea苏木素染色液染色3-5min。

6、水洗、晾干、镜检。

(二)冰冻切片：

1、冰冻切片回温至37℃，水中浸泡1～2min。

2、自然晾干，ACP固定液4℃固定1～3min。

3、水洗，稍微晾干(不易过分干燥)。

4、切片入ACP孵育液，置于37℃温箱，避光浸染45～60min，水洗。

5、复染：Lea苏木素染色液染色5～10min。

6、水洗、晾干、镜检。

【染色结果】

阳性颗粒                               紫红色

细胞核                               蓝色

【临床意义】

1、毛细胞白血病的毛细胞ACP染色呈强阳性或中度阳性，且不被酒石酸抑制。

2、急性白血病幼单核细胞ACP染色呈阳性，原淋巴细胞呈弱阳性，原粒细胞对ACP反应不一。

3、T淋巴细胞ACP染色呈阳性，颗粒粗大、分布密集。B淋巴细胞呈阴性或颗粒细小的弱阳性。

4、戈谢细胞呈强阳性，尼曼-皮克细胞呈阴性或弱阳性。

【注意事项】

1、ACP孵育液易失效，本法宜用皮肤穿刺血涂片，晾干后应及时染色

2、对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。

3、样本需新鲜，取材后应立即处理，否则会影响酶的活性。

4、组织固定需在4℃冰箱进行，时间不宜超过24h，否则酶活性会减弱或消失。

5、一般不建议用石蜡切片。如果需要用石蜡切片，组织在石蜡包埋时温度不宜高于56℃，应使用熔点为52～54℃的石蜡进行浸蜡，浸蜡时间要短，否则酶活性会减弱或消失。

6、不纯的二甲苯会分解黑色沉淀，宜选用AR级以上的二甲苯。

7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。